Comparación de dos métodos asequibles de extracción de ADN para la detección molecular de cepas de Salmonella aisladas de calzas de celulosa de granjas de pollos de engorde
DOI:
https://doi.org/10.33448/rsd-v12i1.39618Palabras clave:
PCR en tiempo real; Sílica; Chelex-100; Salmonella.Resumen
Existen muchos métodos para purificar ADN bacteriano. La eficiencia de la PCR puede variar dependiendo de la cantidad y cualidad de ADN utilizada. Este estudio evaluó la eficiencia, calidad, costo y rapidez de dos protocolos, sílica y Chelex-100 para la extracción de veinte aislados de Salmonella provenientes de calzas de celulosa. El objetivo del trabajo fue comparar los métodos de extracción para la detección de especies de Salmonella. ADN fue extraído y sometido a PCR en tiempo real. La cantidad e integridad fue determinada por espectrofotometría y electroforesis en gel de agarosa y eficiencia por qPCR. Para calcular el límite de detección (LOD), una cepa de referencia S. Typhimurium fue diluida en serie resultando en coeficientes de regresión lineal de R 2=0,992 (eficiência 119,31) y R 2=0,958 (eficiência 93,33) para sílica y Chelex, con el mismo LOD de 10 -4. La sílica resultó en mayor cantidad de ADN, 85,01 ± 59,11 comparada a 50,74 ± 12,95 y para la razón 260/280 1,77 ± 0,02 versus 1,63 ± 0,13. La integridad de la sílica pareció mejor en el gel, con una banda superior a 2.000 pb, ADN de Chelex-100 pareció imperceptible o degradado. La media del ciclo de cuantificación (Cq) de la sílica fue 17,08 ± 0,73 y del Chelex-100, 17,64 ±0,56 (sugiriendo menor concentración de ADN). Los resultados demostraron que los dos métodos fueron capaces de detectar Salmonella, una vez que la PCR fue positiva para todas las muestras, la eficiencia resultó superior para sílica. Chelex-100 fue más rápido y asequible.
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