Métodos de extracción de DNA de espermatozoides caninos para sexado por PCR cuantitativa

Autores/as

DOI:

https://doi.org/10.33448/rsd-v12i4.40769

Palabras clave:

Cromosoma; Perro; Fenol-cloroformo; Semen; Sexado de esperma.

Resumen

Apesar de la similitud con otras células, el esperma tiene una cromatina compacta, lo que dificulta la extracción de DNA. En base a esto, este estudio comparó diferentes concentraciones de esperma y tres técnicas de extracción de DNA para su uso en la PCR cuantitativa (reacción en cadena de la polimerasa). Se probaron cuatro protocolos: no comercial usando fenol:cloroformo (M1) solo o asociado con un kit de preparación (Differex-System-Kit- M2) y dos protocolos comerciales con mini columnas de extracción-M3 (Illustra-Blood-Genomic-Prep-Mini-Spin) y M4 (Wizard®-Genomic-DNA-Purification). Se utilizaron cuatro concentraciones de esperma (1, 10, 30 y 50x106 células) del eyaculado de 3 perros. Después de la extracción, el DNA se utilizó para qPCR con primers dirigidos contra los cromosomas X e Y. Los protocolos M1 y M2 recuperaron una alta concentración de DNA independientemente de la concentración inicial de espermatozoides, con una relación satisfactoria en absorbancias de 260/280 (media 1,80 y 2,10, M1 y M2 respectivamente). Mientras que los otros métodos recuperaron baja concentración de DNA con baja calidad en M3 (media 1,60 en M3 y 1,85 en M4) independientemente de la concentración de espermatozoides. El DNA de espermatozoides caninos utilizando protocolos de fenol:cloroformo (M1 y M2) fue eficiente. El protocolo M1 permitió en particular la cuantificación de los cromosomas X e Y en qPCR utilizando un bajo número de espermatozoides (1x106). Según nuestro conocimiento, este estudio proporciona la primera comparación de las técnicas de extracción de DNA de esperma canino. Teniendo en cuenta los resultados obtenidos, se puede concluir que independientemente de la concentración de espermatozoides utilizada, la extracción de DNA de espermatozoides utilizando fenol:cloroformo tiene resultado satisfactorio de la muestra extraída y permite la cuantificación de la secuencia de genes diana en qPCR, lo que permitió su uso posterior en el sexado de espermatozoides y otras biotecnologías.

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Publicado

25/03/2023

Cómo citar

MOTHÉ, G. B. .; SCOTT, C.; MALOSSI, C. D. .; ARAÚJO-JUNIOR, J. P. .; SOUZA, F. F. de . Métodos de extracción de DNA de espermatozoides caninos para sexado por PCR cuantitativa. Research, Society and Development, [S. l.], v. 12, n. 4, p. e3612440769, 2023. DOI: 10.33448/rsd-v12i4.40769. Disponível em: https://rsdjournal.org/index.php/rsd/article/view/40769. Acesso em: 19 sep. 2024.

Número

Sección

Ciencias Agrarias y Biológicas