Quantificação de espécies animais utilizando PCR em tempo real quantitativa (qPCR) para verificar fraudes em produtos cárneos

Resumo

A rotulagem de alimentos é fundamental para evitar a ingestão de uma espécie de carne específica por motivos religiosos e razões culturais, mas, principalmente, para evitar fraudes com o propósito de obter vantagens financeiras. O método real-time qPCR é comumente utilizado para quantificar o DNA em uma determinada amostra por quantificação relativa (concentração do DNA alvo específico sobre a concentração do DNA endógeno). Em estudos que usam qPCR para quantificar espécies contaminantes, a normalização é realizada usando um gene de referência de cópia única, como a miostatina, presente na maioria dos mamíferos e das aves. Esse estudo teve por objetivo padronizar a técnica real-time qPCR para a obtenção de resultados quantitativos relativos em carnes bovinas fraudadas. Para a padronização do método, o limite de detecção (LD) resultou em um sinal de fluorescência Cq de 36.80 ciclos em pelo menos 9 de 10 repetições (90%) na concentração de 0,008% em cavalo e Cq de 36.60 ciclos em pelo menos 7 de 10 repetições (70%) na concentração de 0,0005% em frango. A concentração mais baixa em que o desvio padrão relativo (RSD) foi ≤25% estava entre 0,125% e 0,031% tanto para cavalo quanto para frango. Mesmo usando curvas padrões de quantificação contendo 50% de misturas de carnes ou 100% de carne pura do alvo, a inclinação da curva, a eficiência de amplificação e a correlação linear estiveram dentro do critério de aceitação recomendado. O ensaio é sensível e uma alternativa na rotina de fiscalização de produtos tanto para alimentação humana quanto animal.